La microbiología es una disciplina fascinante que estudia los seres vivos microscópicos. Los microbiólogos utilizan diferentes técnicas para identificar y visualizar estas pequeñas criaturas. Una de estas técnicas es la tinción, que utiliza colorantes químicos para distinguir entre distintos tipos de microorganismos. Pero, ¿cómo funcionan estos colorantes? La respuesta radica en el uso de mordientes.
¿Qué es un mordiente en microbiología?
Un mordiente es una sustancia química que se agrega a un colorante para que se adhiera de manera permanente a un organismo. En otras palabras, el mordiente “ancla” el colorante al organismo, aumentando su afinidad por las estructuras celulares específicas. Esto permite que el colorante permanezca en el organismo después de la decoloración y el lavado, lo que hace posible visualizarlo mediante microscopía óptica.
La mayoría de los mordientes son iones, ya que la carga eléctrica del ion atrae la carga eléctrica del colorante. Los iones metálicos, como el hierro y el cromo, actúan como mordientes comunes en microbiología, aunque también se utilizan iones de haluro y otros tipos de moléculas.
Ejemplos de mordientes en microbiología
Hay muchos ejemplos de mordientes utilizados en microbiología para la tinción y visualización de diferentes tipos de microorganismos. A continuación, se presentan algunos ejemplos comunes de mordientes:
1. Ácido crómico: Un mordiente común utilizado en la tinción de Gram, junto con el cristal violeta. El mordiente ayuda a fijar el colorante en las células bacterianas para una mejor visualización.
2. Alcohol etílico: Este mordiente se usa en la tinción de hematoxilina de hierro para deshidratar y viabilizar la coloración. Sin embargo, su acción no debe prolongarse ya que puede desvanecer el colorante.
3. Fenol: El fenol es un mordiente no iónico utilizado en la tinción ácido-rápida de Ziehl-Neelsen para mantener el colorante en la pared celular de las micobacterias ácido-alcohol resistentes.
4. Iodo: Este mordiente se utiliza en la tinción de Gram para fijar el cristal violeta en las células bacterianas.
5. Ácido pícrico: Un mordiente utilizado en la tinción de hematoxilina-eosina, aunque puede perjudicar la tonalidad de la hematoxilina.
Cómo funciona la tinción de Gram
La tinción de Gram es una técnica común en microbiología que distingue entre bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Fue desarrollada por el microbiólogo danés Christian Gram en 1884. Esta técnica utiliza dos colorantes: cristal violeta y safranina. Estos colorantes se aplican en un orden específico con un mordiente, el iodo, agregado entre ellos. Las bacterias Gram-positivas retienen el cristal violeta y aparecen de color púrpura bajo el microscopio, mientras que las Gram-negativas se tiñen con safranina y aparecen de color rosa.
El ácido acético o el alcohol se utilizan para decolorar la muestra después de la primera tinción. En la tinción de Gram, las bacterias Gram negativas pierden su tinción violeta durante la decoloración, mientras que las Gram positivas retienen el colorante. Se cree que esto se debe a la estructura de la pared celular de la bacteria, siendo las paredes celulares de las bacterias Gram negativas más delgadas y flexibles, por lo que son más susceptibles a la acción del decolorante y se desprenden con mayor facilidad que las paredes celulares de las bacterias Gram positivas, que son más gruesas y rígidas.
Otras técnicas de tinción en microbiología
Además de la tinción de Gram, existen otras técnicas de tinción utilizadas en microbiología para visualizar diferentes tipos de microorganismos. Estos incluyen:
1. Tinción con hematoxilina de hierro: Esta técnica se utiliza para teñir el ADN en los núcleos de los microorganismos y es utilizada para visualizar parásitos en la materia fecal de los humanos. El hierro se utiliza como mordiente en esta técnica.
2. Tinción de ácido-alcohol resistencia: También conocida como tinción de Ziehl-Neelsen, esta técnica se utiliza para identificar micobacterias, incluyendo Mycobacterium tuberculosis, el agente causante de la tuberculosis. El colorante utilizado es fucsina básica, que se mantiene en su lugar con el mordiente fenol.
3. Tinción rápida con ácido: Esta técnica se utiliza para detectar la presencia de micobacterias en el esputo. Se tiñen las bacterias con el tinte químico fucsina, que se mantiene en su lugar con el mordiente fenol.
Cómo los mordientes afectan la afinidad del colorante
Como se mencionó anteriormente, los mordientes aumentan la afinidad del colorante por las estructuras celulares específicas. En la tinción de Gram, el mordiente iodo se utiliza para fijar el cristal violeta en las células bacterianas. Sin embargo, si el iodo se omite en la tinción de Gram, el cristal violeta se decolorará durante el proceso de lavado y decoloración. Los mordientes también pueden influir en la afinidad del colorante por diferentes estructuras celulares. Por ejemplo, algunos mordientes pueden engrosar estructuras celulares, lo que aumenta la afinidad del colorante por ellas.
Tipos de técnicas de tinción en microbiología
Existen tres tipos de técnicas de tinción utilizadas en microbiología: simples, diferenciales y específicas.
1. Tinciones simples: En estas técnicas, solo se utiliza un colorante para incrementar el contraste.
2. Tinciones diferenciales: Estas técnicas utilizan dos tintes para distinguir entre tipos de microorganismos. Además de la tinción de Gram, existen otras tinciones diferenciales que separan los microorganismos en diferentes grupos.
3. Tinciones específicas: Estas técnicas utilizan colorantes específicos para identificar estructuras celulares específicas, como flagelos o cápsulas.
Conclusión
Los mordientes son sustancias químicas importantes en la microbiología ya que permiten que los colorantes queden adheridos a las estructuras celulares específicas de los microorganismos. La tinción de Gram y otras técnicas de tinción utilizadas en microbiología utilizan mordientes para fijar los colorantes en su lugar. Comprender cómo funcionan los mordientes puede ayudarnos a comprender mejor cómo los microbiólogos pueden identificar y visualizar diferentes tipos de microorganismos.
