La coloración ha sido una técnica fundamental en el campo de la medicina desde hace mucho tiempo. Uno de los colorantes más populares es el colorante Wright, que se utiliza para estudiar los glóbulos blancos y los glóbulos rojos en sangre periférica y médula ósea. La técnica de tinción de Wright fue creada por James Homer Wright en 1902. Es una técnica policromática que ofrece varios colores dependiendo de la estructura que absorbe el colorante. En este artículo, explicaremos cómo se prepara el colorante Wright y todos los factores que lo rodean. ¡Acompáñanos en este interesante viaje hacia la ciencia de la coloración!
¿Qué es la tinción de Wright?
La tinción de Wright es una técnica de coloración que se utiliza para realizar recuentos diferenciales de glóbulos blancos y estudiar la morfología de los glóbulos rojos, plaquetas y leucocitos en sangre periférica y médula ósea. También se utiliza en otras muestras como secreción nasal, moco fecal, esputo y piel, entre otros. La coloración de Wright nació de la tinción de Romanowsky, que consiste en una solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina Y) y otro básico (azul de metileno) y sus productos de oxidación. El efecto observado dependerá del enlace de los colorantes a las estructuras químicas y a las interacciones del azul B y la eosina Y.
¿Qué materiales necesitamos para preparar el colorante Wright?
Los materiales necesarios para realizar la coloración son: colorante de Wright, solución amortiguadora tamponada, láminas portaobjetos o cubreobjetos, puente de coloración, pisetas con agua o buffer para el lavado, un cronómetro y algún material secante.
- Colorante de Wright: Una solución a base de eosina, azul de metileno y otros colorantes.
- Solución amortiguadora tamponada: Una solución acuosa que contiene sales que ayudan a mantener el pH estable.
- Láminas portaobjetos o cubreobjetos: Superficies donde se colocarán las muestras a analizar.
- Puente de coloración: Un puente hecho de papel absorbente que se coloca sobre las láminas y que evita que se sequen durante el proceso.
- Pisetas con agua o buffer para el lavado: Soluciones que se utilizan para eliminar los excesos de colorante y de solución amortiguadora tamponada.
- Cronómetro: Un reloj utilizado para medir los tiempos de tinción y de lavado.
- Material secante: Papel de filtro o similar utilizado para secar las láminas.
¿Cómo se prepara el colorante Wright?
El colorante de Wright es una solución a base de eosina, azul de metileno y otros colorantes. El pH ajustado a 7,2 del colorante es esencial para que las estructuras celulares puedan absorber los colorantes adecuadamente. A continuación, se describen los pasos necesarios para preparar el colorante Wright:
1. Preparación de la solución de eosina
Primero, se prepara una solución concentrada de eosina. Para la solución de eosina, se disuelve una cantidad de eosina en un volumen específico de etanol absoluto. La concentración de eosina no es crítica, pero se recomienda utilizar una concentración de 0,5% – 1,0%.
2. Preparación de la solución de azul de metileno
En segundo lugar, se prepara una solución concentrada de azul de metileno. Para la solución de azul de metileno, se disuelve una cantidad de azul de metileno en un volumen específico de agua. La concentración de azul de metileno no es crítica, pero se recomienda utilizar una concentración de 1,0% – 1,5%.
3. Preparación de la solución de colorante Wright
La solución de colorante Wright se prepara combinando la solución de eosina y la solución de azul de metileno en una proporción determinada. La solución de colorante Wright puede comprarse comercialmente o prepararse en el laboratorio. La proporción de eosina y azul de metileno puede variar, pero generalmente se utiliza una proporción de 3:1 (eosina: azul de metileno) en 0.1% acuoso amortiguado a pH 7.2.
¿Qué tiñe el colorante de Wright?
La mezcla de colorantes usados en la tinción de Wright provoca el efecto conocido como Romanowsky, es decir, proporciona una hermosa coloración púrpura a los núcleos de los leucocitos y a los gránulos neutrofílicos, mientras que los glóbulos rojos se tiñen de color rosado.
¿Cómo se utiliza la técnica de tinción de Wright?
El primer paso en el uso de la técnica de tinción de Wright es extender la muestra en la lámina portaobjetos. Luego, se fija la muestra en la lámina utilizando un reactivo fijador, generalmente metanol. La lámina fijada se sumerge en solución de colorante Wright durante un tiempo determinado, generalmente alrededor de 5 minutos. Finalmente, se lava la lámina con agua o buffer para eliminar el exceso de colorante y se seca con papel absorbente u otro material secante.
¿Cuánto tiempo se deja el colorante Wright?
Cubrir frotis con solución Wright por 5 a 8 minutos.
¿Cuáles son los factores importantes a considerar en la tinción de Wright?
El resultado de tinción puede ser influenciado por diferentes factores como el pH del colorante Wright y de la solución amortiguadora, así como el tiempo de tinción y de fijación. La elección de la solución amortiguadora tamponada es esencial para garantizar un pH estable. El alcohol (metanol) es el reactivo más utilizado para fijar frotis en todos los laboratorios, ya que proporciona mejores resultados que el etanol. La concentración ideal es del 99%.
En general, la técnica de tinción de Wright es una técnica importante y valiosa en el campo de la medicina. La preparación del colorante Wright requiere una atención cuidadosa a los detalles y la elección de los materiales correctos para asegurar resultados precisos. Con una combinación adecuada de protocolo y experiencia, puede obtenerse una imagen clara de los glóbulos blancos y rojos, lo que ayuda a los médicos y especialistas en diagnóstico a identificar enfermedades y trastornos con mayor precisión.
